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掃描電鏡樣品的處理過程介紹

發布時間:2021-04-16      點擊次數:2213
掃描電鏡(SEM)是介于透射電鏡和光學顯微鏡之間的一種微觀形貌觀察手段,可直接利用樣品表面材料的物質性能進行微觀成像。掃描電鏡的結構包括電子光學系統、圖像顯示和記錄系統、真空系統、X射線能譜分析系統。其基本原理是用極細的電子束在樣品表面上掃描,然后按電視原理放大成像,顯示在電視屏幕上。
 
掃描電鏡樣品的處理過程:
 
主要包括表面清潔、固定、漂洗和脫水等過程,基本上與透射電鏡樣品的處理方法相似,但也有其特殊之處。
 
1. 樣品大小 所切取樣品比透射電鏡樣品稍大一些,為8~10mm2,高約5mm。
 
2. 清潔表面 清潔表面并充分暴露樣品表面。常用清洗液有蒸餾水、生理鹽水、緩沖液及含酶的清洗液等。
 
3. 固定和脫水 常用的固定方法是戊二醛-四氧化餓雙重固定,也可用戊二醛單固定法。
 
常用脫水劑是乙醇或丙酮。脫水劑濃度梯度增加,從30%或50%開始至100%進行脫水;易變形樣品脫水劑濃度梯度宜緩慢遞增。
 
4. 樣品的干燥 脫水后,需要將樣品中的脫水劑徹底揮發干凈,即樣品干燥。其方法有:空氣干燥 、真空干燥、冷凍干燥和臨界點干燥。
 
5. 樣品表面導電處理 用金屬鍍膜法和組織導電處理技術,一是可增強導電能力,消除荷電效應;二是增加樣品表面二次電子發射率,加強訊號,提高圖像反差。
 
(1)金屬鍍膜:使樣品表面覆蓋薄層金屬膜,這層薄膜與樣品表面的凹凸形態完全一致,使標本表面的形貌得以反映。常用的金屬有金、鉑、鉬、或金/鉑、鉑/銫合金。鍍膜的方法有真空鍍膜法和離子濺射法。
 
(2)組織導電技術:其目的是為提高導電率克服生物材料的荷電效應,提高樣品表面二次電子發射率。組織導電處理也稱導電染色,是利用某些金屬鹽類能與生物材料中的蛋白質、脂類和淀粉等結合,使樣品表面離子化,使組織導電性增加;并且提高二次電子的發射率。可用醋酸鈾、碘化鉀、丹寧酸等處理標本。
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